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Western及IP細胞裂解液

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品　　牌：

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出廠價：
220

主要規格：
100ml

用　　途：

Western及IP細胞裂解液產品編號: P1001 產品包裝: 100ml 產品價格: 220.00元我們生產的Western及IP細胞裂解液(Cell lysis buffer for Western and IP)，是一種在非變性條件下裂解細胞的裂解液。本細胞裂解液裂解的細胞，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀(immunol precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)。 Western及IP細胞裂解液的主要成分為20mM Tris(pH7.5)，150mM NaCl，1% Triton X-100，以及2mM sodium pyrophosphate，25mM β-glycerophosphate，1mM EDTA，1mM Na3VO4，0.5 ug/ml leupeptin等多種抑制劑。可以有效抑制蛋白的降解，并維持原有的蛋白間相互作用。用Western及IP細胞裂解液裂解得到的蛋白樣品，可以用BCA蛋白濃度測定試劑盒測定蛋白濃度。由于含有較高濃度的Triton X-100等干擾物質，不能用Bradford法測定由本裂解液裂解得到樣品的蛋白濃度。包裝清單：產品編號產品名稱包裝 P1001 Western及IP細胞裂解液 100ml PMSF（100mM） 1.5ml 說明書 1份保存條件： -20℃保存，一年有效。注意事項：為取得最佳的使用效果，盡量避免過多的反復凍融。可以適當分裝后使用。裂解樣品的所有步驟都需在冰上或4℃進行。關于裂解液的選擇，一方面可以參考我們生產的各種裂解液主要特點、差異，選擇合適的裂解液；另一方面也需要通過一些預實驗來摸索最佳的適合您實驗條件的裂解液。為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。使用說明：對于培養細胞樣品： 1. 融解Western及IP細胞裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。 2. 對于貼壁細胞：去除培養液，用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍(如果血清中的蛋白沒有干擾，可以不洗)。按照6孔板每孔加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后，細胞就會被裂解。對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成50-100萬細胞/管，然后再裂解。大團的細胞較難裂解充分，而少量的細胞由于裂解液容易和細胞充分接觸，相對比較容易裂解充分。 3. 充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。裂解液用量說明：通常6孔板每孔細胞加入100微升裂解液已經足夠，但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到150微升或200微升。對于組織樣品： 1. 把組織剪切成細小的碎片。 2. 融解Western及IP細胞裂解液，混勻。取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。 3. 按照每20毫克組織加入100-200微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量。) 4. 用玻璃勻漿器勻漿，直至充分裂解。 5. 充分裂解后，10000-14000g離心3-5分鐘，取上清，即可進行后續的PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。 6. 如果組織樣品本身非常細小，可以適當剪切后直接加入裂解液裂解，通過強烈vortex使樣品裂解充分。然后同樣離心取上清，用于后續實驗。直接裂解的優點是比較方便，不必使用勻漿器，缺點是不如使用勻漿器那樣裂解得比較充分。附：我們生產的各種裂解液主要特點、差異和選擇首先請參考下表，了解各種裂解液的主要特點和差異。產品編號 P1001 P1002 P1004 P1006 P1010 P1012 產品名稱 Western及IP細胞裂解液 RIPA裂解液(強) RIPA裂解液(中) RIPA裂解液(弱) NP-40裂解液 SDS裂解液有效裂解成分 1% Triton X-100 1% Triton X-100, 1% deoxycholate, 0.1% SDS 1% NP-40, 0.5% deoxycholate, 0.1% SDS 1% NP-40,0.25% deoxycholate 1% NP-40 1% SDS 裂解強度溫和強中溫和溫和強對膜蛋白的提取一般很好較好一般一般很好對胞漿蛋白的提取很好很好很好很好很好很好對核蛋白的提取較好很好較好較好較好很好胞漿磷酸化蛋白提取很好很好很好很好很好很好細胞核轉錄因子提取很好很好很好很好很好很好含蛋白酶抑制劑是是是是是是含磷酸酯酶抑制劑是是是是是是主要用途 WB, IP,co-IP WB, IP WB, IP WB, IP, co-IP WB, IP,co-IP WB, ChIP 用于普通的Western、IP或co-IP，我們推薦使用Western及IP細胞裂解液(P0013)，該裂解液已被國內各大研究機構廣泛使用，用戶普遍反映很好。裂解細胞或組織后，沒有非常粘滯的透明狀DNA團塊形成，不必采用超聲處理等就可以非常理想地用于后續操作。另外該裂解液裂解的產物也適合用于磷酸化蛋白的Western檢測。對于某些特殊蛋白的IP，如果發現Western及IP細胞裂解液(P0013)效果不是非常理想，可以嘗試用RIPA裂解液(強、中或弱)或NP-40裂解液。如果發現IP的時候背景很高，即非特異的蛋白也被IP下來，則需要選用裂解強度較高的裂解液，例如RIPA裂解液(強或中)。如果發現目的蛋白無法被IP下來，則說明裂解液的強度過強，可以使用較為溫和的裂解液例如RIPA裂解液(弱)或NP-40裂解液。對于某些難溶解蛋白的Western，如果發現Western及IP細胞裂解液(P0013)效果不是非常理想，可以嘗試使用裂解強度更高的裂解液例如RIPA裂解液(強、中)或SDS裂解液。

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