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篤瑪兔肌酸激酶(CK) ELISA 試劑盒產品簡介

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品　　牌：
DM

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出廠價：
1

主要規格：
96T/48T

用　　途：
科研

篤瑪兔肌酸激酶(CK) ELISA 試劑盒產品簡介常用標簽包括有Flag、myc、HA、His、GST、GFP、MBP等。 Flag標簽系統利用一個短的親水性八氨基酸肽（DYKDDDDK）融合到目標蛋白；其純化條件是非變性的，因此可以純化所有有活性的融合蛋白。 His標簽是由6個組氨酸（His-His-His-His-His-His）組成的短肽，專門設計用于重組蛋白的吸附純化。由于分子量小，且較容易分離和純化，是目前使用最廣泛的一種。 GST標簽體系具有蛋白表達率高，表達產物純化方便，利于GST抗體制備的特點。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可從細菌裂解液中提取，在不變性的條件下通過親和層析得到。 GFP或其突變體EGFP等廣泛用于基因表達效率的檢測，以及和目的蛋白融合表達用于檢測目的蛋白的表達和分別。GFP抗體不經可以檢測GFP或其適當的突變體，也可以檢測和GFP或其適當的突變體融合表達蛋白的表達、細胞內定位，以及純化、定性或定量檢測GFP融合表達蛋白等。 Myc標簽（序列為：EQKLISEEDL）已成功應用于WB雜交技術、免疫沉淀IP和流式細胞術中。因此可用于檢測重組蛋白在細菌、酵母、昆蟲細胞和哺乳細胞中的表達情況。Myc重組蛋白質可通過偶聯Myc標簽抗體到活化的瓊脂糖上而進行親和純化。但Myc重組蛋白的低pH洗脫條件往往會降低蛋白質的活力，因此Myc標簽系統廣泛應用于檢測但很少用于純化。 HA標簽系統利用一個HA（influenza hemagglutintin epitope:YPYDVPDYA）短肽融合到目標蛋白。HA標簽可位于蛋白質的C端或N端，該系統已廣泛應用于多種細胞類型，相應的HA標簽抗體也被廣泛運用。 MBP標簽蛋白大小為40kDa，由大腸桿菌K12的malE基因編碼。MBP可增加在細菌中過量表達的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在細菌中表達，MBP可以融合在蛋白的N端或C端。可用MBP抗體或表達的目的蛋白特異性抗體檢測MBP標簽標記的重組蛋白。其余標簽抗體還有V5、GFP、RFP、β-Actin、β-Tubulin、GAPDH、ERK1、AU1、Avi、B、CBP、DDDDK、E、E2、Glu-Glu、HAT、HPC4、HSV、KT3、KLH、MAT、Protein A、S、S1、SNAP、SRT、NWSHPQFEK、SUMO、T7、Tag-100、TAP、Trx、Ty1、TF、Universal、VSV-G等，但應用相對較少。篤瑪兔肌酸激酶(CK) ELISA 試劑盒產品簡介 ELISA 實驗步驟： 1.包被抗原：稀釋液pH 9.6 碳酸鹽緩沖液，多肽濃度2ug/ml，0.1ml/孔，4oC過夜，洗凈。 2.1%BSA (pH 9.6 碳酸鹽緩沖液) 封閉，0.1ml/孔，37oC1h，洗凈。 3.稀釋抗血清(可稀釋不同濃度) 0.1ml/孔，37oC 30分鐘，洗凈。 4.稀釋辣根過氧化物每標記的二抗0.1ml/孔，37oC 40分鐘，洗凈。 5.顯色：TMB顯色 A液：四甲基聯苯胺10mg 溶于DMF1ml中，再用pH5.0檸檬酸緩沖液稀釋100倍. B液：5ul加蒸餾水12.5ml 。終止液：2N硫酸 A液、B液各一滴，比光顯色10分鐘，終止液一滴。 6.450nm 波長測OD值篤瑪兔肌酸激酶(CK) ELISA 試劑盒產品簡介 Elisa試驗操作中可能影響結果的原因及其相應的解決辦法 1 選擇試劑選擇質量優良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡至少30分鐘。 2 加樣可能原因： 1）血清或血漿標本分離不好即進行加樣； 2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時)； 3）加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。解決辦法： 1）標本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內。 2) 加樣后及時放入孵箱。 3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。 4) 如果采用AT或其他全自動加樣，最好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5) 標本較多時，請分批操作。 3 孵育可能原因： 1) 孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發，吸附于孔壁，難于清洗徹底； 2) 孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗徹底。解決辦法： 1) 貼封片或加蓋； 2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。 4 洗板可能原因： 1) 采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉。 2) 采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不徹底；洗板針堵塞，抽吸不完全；洗板不暢，導致洗板效果差。 3) 反應板過多造成洗板等待時間長。解決辦法： 1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后最好在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干； 2) 合理安排，或多用幾臺洗板機。 5 顯色可能原因： 1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑； 2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。解決辦法： 1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用； 2) 加樣時保持顯色劑不外流； 3) A、B液應避免接觸金屬器械。 6 終止可能原因如加終止液時產生較多氣泡，導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。 7 讀板如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸；盡可能實現ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質量。在實際操作中，除了選擇優良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時做好室內質控、室間質評，以嚴謹的工作作風檢測每一份標本，才能保證檢測質量。

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楊燕燕

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