檢測認證人脈交流通訊錄
- 凍干羊抗人C9血清 操作步驟 試管法（改良 Mayer 法） 1、致敏羊紅細胞： 2%綿羊紅細胞加等量稀釋后的溶血素（ 1:2000），混勻，置 37℃水浴 30min。 2、稀釋血清：待測血清 0.2ml，加應用液 3.8ml，稀釋度為 1:20。 3、配制溶血標準管：全溶血管:2%綿羊紅細胞 2ml 加 8ml 蒸餾水，混勻。 50%溶血管:取全溶血管液 2ml 加緩沖液 2ml。 4、按表所示，依次加各成分于試管中，混勻，置 37℃水浴 30min， 第 10 管為非溶血對照：補體 CH50 測定試管法 5、結果測定：取出試管， 2000r/min 離心 10min，對照管應不溶血。肉眼比色，選與 50%溶血標準管相近二管，再用分光光度計測（波長 542nm、 0.5cm 比色杯） OD 值， 確定與標準管最接近者為終點管，然后按下公式計算 CH50 值： 血清補體 CH50（ U/ml） =（ 1/血清用量）×稀釋度。 如第 5 管為終點管，測待測血清中CH50為66.7U/ml。血清補體CH50正常值為50-100U/ml。 凍干羊抗人C9血清 應用范圍： 酶標試劑、免疫比濁試劑、免疫膠乳試劑生產、提取純化抗體、組化實驗中 對應抗原，或封閉對應雜抗體，測定對應抗原濃度，或抗原夾芯法測定對應 抗體，吸收雜抗原成分，層析純化抗原，分析與鑒定對應抗原成分，封閉交 叉抗原，測定對應抗原成分，測定抗原純度等。 1.液體抗血清保存原則：避免反復凍融 2.短期保存的抗血清：如幾周內就會使用，收到后推薦在 2-8℃保存，2-8℃短暫保存 數周對活性沒有影響。 3.長期保存的抗體：如抗體需超過 1 個月后才會使用，請酌情分裝后于-20℃保存。 凍干羊抗人C9血清 常用標簽包括有Flag、myc、HA、His、GST、GFP、MBP等。 Flag標簽系統利用一個短的親水性八氨基酸肽（DYKDDDDK）融合到目標蛋白；其純化條件是非變性的，因此可以純化所有有活性的融合蛋白。 His標簽是由6個組氨酸（His-His-His-His-His-His）組成的短肽，專門設計用于重組蛋白的吸附純化。由于分子量小，且較容易分離和純化，是目前使用最廣泛的一種。 GST標簽體系具有蛋白表達率高，表達產物純化方便，利于GST抗體制備的特點。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可從細菌裂解液中提取，在不變性的條件下通過親和層析得到。 GFP或其突變體EGFP等廣泛用于基因表達效率的檢測，以及和目的蛋白融合表達用于檢測目的蛋白的表達和分別。GFP抗體不經可以檢測GFP或其適當的突變體，也可以檢測和GFP或其適當的突變體融合表達蛋白的表達、細胞內定位，以及純化、定性或定量檢測GFP融合表達蛋白等。 Myc標簽（序列為：EQKLISEEDL）已成功應用于WB雜交技術、免疫沉淀IP和流式細胞術中。因此可用于檢測重組蛋白在細菌、酵母、昆蟲細胞和哺乳細胞中的表達情況。Myc重組蛋白質可通過偶聯Myc標簽抗體到活化的瓊脂糖上而進行親和純化。但Myc重組蛋白的低pH洗脫條件往往會降低蛋白質的活力，因此Myc標簽系統廣泛應用于檢測但很少用于純化。 HA標簽系統利用一個HA（influenza hemagglutintin epitope:YPYDVPDYA）短肽融合到目標蛋白。HA標簽可位于蛋白質的C端或N端，該系統已廣泛應用于多種細胞類型，相應的HA標簽抗體也被廣泛運用。 MBP標簽蛋白大小為40kDa，由大腸桿菌K12的malE基因編碼。MBP可增加在細菌中過量表達的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在細菌中表達，MBP可以融合在蛋白的N端或C端。可用MBP抗體或表達的目的蛋白特異性抗體檢測MBP標簽標記的重組蛋白。 其余標簽抗體還有V5、GFP、RFP、β-Actin、β-Tubulin、GAPDH、ERK1、AU1、Avi、B、CBP、DDDDK、E、E2、Glu-Glu、HAT、HPC4、HSV、KT3、KLH、MAT、Protein A、S、S1、SNAP、SRT、NWSHPQFEK、SUMO、T7、Tag-100、TAP、Trx、Ty1、TF、Universal、VSV-G等，但應用相對較少。
