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篤瑪乙酰白藜蘆醇說明書

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品　　牌：
DM

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出廠價：
1 元/瓶

主要規格：
20mg

用　　途：
科研

乙酰白藜蘆醇樣品收集、處理及保存方法 1. 血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。 2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。 3. 細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。 4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。 5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。乙酰白藜蘆醇常用標簽包括有Flag、myc、HA、His、GST、GFP、MBP等。 Flag標簽系統利用一個短的親水性八氨基酸肽（DYKDDDDK）融合到目標蛋白；其純化條件是非變性的，因此可以純化所有有活性的融合蛋白。 His標簽是由6個組氨酸（His-His-His-His-His-His）組成的短肽，專門設計用于重組蛋白的吸附純化。由于分子量小，且較容易分離和純化，是目前使用最廣泛的一種。 GST標簽體系具有蛋白表達率高，表達產物純化方便，利于GST抗體制備的特點。GST融合蛋白在水溶液中可溶，可從細菌裂解液中提取，在不變性的條件下通過親和層析得到。 GFP或其突變體EGFP等廣泛用于基因表達效率的檢測，以及和目的蛋白融合表達用于檢測目的蛋白的表達和分別。GFP抗體不經可以檢測GFP或其適當的突變體，也可以檢測和GFP或其適當的突變體融合表達蛋白的表達、細胞內定位，以及純化、定性或定量檢測GFP融合表達蛋白等。 Myc標簽（序列為：EQKLISEEDL）已成功應用于WB雜交技術、免疫沉淀IP和流式細胞術中。因此可用于檢測重組蛋白在細菌、酵母、昆蟲細胞和哺乳細胞中的表達情況。Myc重組蛋白質可通過偶聯Myc標簽抗體到活化的瓊脂糖上而進行親和純化。但Myc重組蛋白的低pH洗脫條件往往會降低蛋白質的活力，因此Myc標簽系統廣泛應用于檢測但很少用于純化。 HA標簽系統利用一個HA（influenza hemagglutintin epitope:YPYDVPDYA）短肽融合到目標蛋白。HA標簽可位于蛋白質的C端或N端，該系統已廣泛應用于多種細胞類型，相應的HA標簽抗體也被廣泛運用。 MBP標簽蛋白大小為40kDa，由大腸桿菌K12的malE基因編碼。MBP可增加在細菌中過量表達的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。如果蛋白在細菌中表達，MBP可以融合在蛋白的N端或C端。可用MBP抗體或表達的目的蛋白特異性抗體檢測MBP標簽標記的重組蛋白。其余標簽抗體還有V5、GFP、RFP、β-Actin、β-Tubulin、GAPDH、ERK1、AU1、Avi、B、CBP、DDDDK、E、E2、Glu-Glu、HAT、HPC4、HSV、KT3、KLH、MAT、Protein A、S、S1、SNAP、SRT、NWSHPQFEK、SUMO、T7、Tag-100、TAP、Trx、Ty1、TF、Universal、VSV-G等，但應用相對較少。乙酰白藜蘆醇洗板方法手工洗板方法：吸去（不可觸及板壁）或甩掉酶標板內的液體；在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙，酶標板朝下用力拍幾次；將推薦的洗滌緩沖液至少0.3ml注入孔內，浸泡1-2分鐘。根據需要，重復此過程數次。自動洗板：如果有自動洗板機，應在熟練使用后再用到正式實驗過程中。

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楊燕燕

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