iTRAQ(Isobaric Tag for Relative Absolute Quantitation)和(Tandem Mass Tags)技術(shù)是分別由美國(guó)AB Sciex公司和Thermo Fisher公司研發(fā)的多肽體外標(biāo)記定量技術(shù)。這兩種技術(shù)采用多個(gè)(2-10)穩(wěn)定同位素標(biāo)簽,特異性標(biāo)記多肽的氨基基團(tuán)進(jìn)行串聯(lián)質(zhì)譜分析,能夠同時(shí)比較多達(dá)10種不同樣本中蛋白質(zhì)的相對(duì)含量,可用于研究不同病理?xiàng)l件下或者不同發(fā)育階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異。 對(duì)于可以傳代的細(xì)胞樣品來(lái)說(shuō),我們可以采取的方法完成對(duì)于細(xì)胞蛋白質(zhì)組的標(biāo)記過(guò)程,但是許多其他研究體系,比如組織樣品以及不能進(jìn)行傳代培養(yǎng)的細(xì)胞來(lái)說(shuō),需要其他的標(biāo)記方法來(lái)完成定量蛋白組學(xué)分析。TMT, iTRAQ等基于體外(in vitro)標(biāo)記的定量方法應(yīng)運(yùn)而生。 iTRAQ標(biāo)簽包括三部分,如下圖: 1. 報(bào)告基團(tuán)(reporter group):指示蛋白樣品豐度水平。 2. 平衡基團(tuán)(balance group):平衡報(bào)告基團(tuán)的質(zhì)量差,使等重標(biāo)簽重量一致,保證標(biāo)記的同一肽段m/z相同。 3. 肽反應(yīng)基團(tuán)(amine-specific reactive group):能與肽段N端及賴氨酸側(cè)鏈氨基發(fā)生共價(jià)連接,從而標(biāo)記上肽段。
來(lái)自不同樣品的同一肽段經(jīng)TMT/iTRAQ試劑標(biāo)記后具有相同的質(zhì)量數(shù),并在一級(jí)質(zhì)譜檢測(cè)(MS1)中表現(xiàn)為同一個(gè)質(zhì)譜峰。當(dāng)此質(zhì)譜峰被選定進(jìn)行碎裂后,在二級(jí)質(zhì)譜檢測(cè)(MS2)中,不同的報(bào)告基團(tuán)被釋放,它們各自的質(zhì)譜峰的信號(hào)強(qiáng)弱,代表著來(lái)源于不同樣品的該肽段及其所對(duì)應(yīng)的蛋白的表達(dá)量的高低。TMT/iTRAQ定量蛋白組學(xué)研究因其測(cè)定jīngzhǔn度高適應(yīng)樣品種類多,目前已有很廣泛的應(yīng)用。百泰派克在傳統(tǒng)的TMT/iTRAQ分析技術(shù)的基礎(chǔ)上,提供TMT/iTRAQ/MultiNotch MS分析技術(shù),使用三級(jí)碎片報(bào)告離子進(jìn)行定量,可進(jìn)一步提高TMT/iTRAQ定量蛋白組學(xué)分析的精度,進(jìn)一步提高定量準(zhǔn)確性。 百泰派克公司采用Thermo Fisher的Q ExactiveHF質(zhì)譜平臺(tái),Orbitrap Fusio Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC,推出基于TMT/iTRAQ/MultiNotch MS的定量蛋白組分析服務(wù)技術(shù)包裹,您只需要將您的實(shí)驗(yàn)?zāi)康母嬖V我們并將您的蛋白寄給我們,我們會(huì)負(fù)責(zé)項(xiàng)目后續(xù)所有事宜,包括蛋白酶切、肽段標(biāo)價(jià)、肽段分離、質(zhì)譜分析、質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)分析、生物信息學(xué)分析。
iTRAQ/TMT定量蛋白組學(xué)分析技術(shù)特點(diǎn)
高通量定量蛋白分析:可以同時(shí)分析10個(gè)樣品;適合大量臨床樣本,多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析,發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物 體外標(biāo)記,適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品 質(zhì)譜分析靈敏度高,可檢測(cè)較低豐度蛋白,大范圍比較蛋白相對(duì)豐度 可與富集磷酸化等修飾肽段的方法聯(lián)用,更準(zhǔn)確研究翻譯后修飾變化
中/英文項(xiàng)目報(bào)告
在技術(shù)報(bào)告中,百泰派克生物科技會(huì)為您提供詳細(xì)的中英文雙語(yǔ)版技術(shù)報(bào)告,報(bào)告包括: 1. 實(shí)驗(yàn)步驟(中英文) 2. 相關(guān)的質(zhì)譜參數(shù)(中英文) 3. 質(zhì)譜圖片 4. 原始數(shù)據(jù) 5. 蛋白差異水平分析 6. 生物信息學(xué)分析
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