檢測認證人脈交流通訊錄
- 操作步驟 1．在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。 10×PCRbuffer5μl dNTPmixl4μl 引物1（10pM）2μl 引物2（10PM）2μl Taq酶（2U/μl）1μl DNA模板（50ng-1μg/μl）1μl 加ddH2O至50μl 視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。 2．調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃40s→58℃30s→72℃60s，循環30-35次，zui后在72℃保溫7min。 3．結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。 4．PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。 技術原理： DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。雙鏈DNA在多種酶的作用下可以變性解鏈成單鏈，在DNA聚合酶與啟動子的參與下，根據堿基互補配對原則復制成同樣的兩分子挎貝。 在聚合酶鏈式反應實驗中發現，DNA在高溫時也可以發生變性解鏈，當溫度降低后又可以復性成為雙鏈。因此，通過溫度變化控制DNA的變性和復性，并設計引物做啟動子，加入DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的體外復制。（DNA高溫變性低溫復性） 發現耐熱DNA聚合同酶--Taq酶對于PCR的應用有里程碑的意義，該酶可以耐受90℃以上的高溫而不失活，不需要每個循環加酶，使PCR技術變得非常簡捷、同時也大大降低了成本，PCR技術得以大量應用，并逐步應用于臨床。 PCR擴增試劑盒如有需要歡迎訪問以下網址與我們取得聯系 http://www.bioke.cn/Products-21142753.html https://www.hbzhan.com/st638008/product_21142753.html
