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檢測(cè)認(rèn)證人脈交流通訊錄
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抗原修復(fù)用于甲醛固定的石蠟包埋組織切片。石蠟切片標(biāo)本用甲醛固定，使得細(xì)胞內(nèi)抗原形成醛鍵、 羧甲鍵而被封閉了部分抗原決定簇， 同時(shí)蛋白之間發(fā)生交聯(lián)而使抗原決定簇隱蔽。所以要求在進(jìn)行免疫組化染色時(shí)，需要行抗原修復(fù)，即將固定時(shí)分子之間所形成的交聯(lián)破壞，而恢復(fù)抗原的原有空間形態(tài)。
酶消化方法是常用的抗原修復(fù)方法之一，常用 0.1%胰蛋白酶和 0.4%胃蛋白酶液。一般說(shuō)來(lái)，胰蛋白酶消化能力較胃蛋白酶弱，主要用于細(xì)胞內(nèi)抗原的消化，胃蛋白酶主要用于細(xì)胞間抗原的消化。工作中要認(rèn)真參照抗體說(shuō)明書(shū)指示進(jìn)行消化酶的選擇，這樣針對(duì)性更強(qiáng)，標(biāo)記效果更理想。
操作說(shuō)明：
胰蛋白酶使用前預(yù)熱 37℃，切片也預(yù)熱 37℃，消化時(shí)間約為 5~30 分鐘;胃蛋白酶消化 37℃時(shí)間為 30 分鐘。適用于被固定遮避的抗原，其中有：Collagen，Complement，Cytokeratin，C-erB-2，GFAP，LCA，LN 等。
胰蛋白酶處理
1、滴加一滴胰蛋白酶工作液于組織上。
2、室溫或 37℃孵育 20-40 分鐘，孵育時(shí)間的長(zhǎng)短依福爾馬林固定時(shí)間及所測(cè)抗原情況而定。
3、蒸餾水沖洗，終止反應(yīng)。
4、阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶。
5、免疫組化染色。
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