上海遠慕生化試劑廠家詳細講述HEPES緩沖鹽溶液(2×HeBS,pH7.05)的操作方法，注意事項及其他咨訊說明等，作為專業的生化試劑供應商，我司所供應的緩沖液品種齊全，價格實惠，品種包含：磷酸鹽緩沖液，原生質體緩沖液，包涵體裂解緩沖液，植物電穿孔緩沖液，DNA中和緩沖液Ⅱ，脫氧核糖核酸緩沖液，更多緩沖液請來電咨詢！

HEPES緩沖鹽溶液(2×HeBS,pH7.05) 說明書

【操作方法】

1、 在轉染前24h用蛋白酶消化培養細胞，取適量數期細胞轉移至新的培養器皿中，使細胞在轉染時生長狀態良好。

2、 在加入DNA之前2～4h,按9ml/10cm培養皿的比例加入完全培養液,置于37℃5% CO2培養箱培養。

3、 取適量乙醇沉淀的DNA溶解于無菌水中，加入50μl 2.5M CaCl2，并充分混勻，使Ca2+終濃度達到0.25M。

4、 用移液器一邊吹打2×HeBS,一邊逐滴加入配制好的CaCl2溶液(操作應迅速，一般在30～60s)，并劇烈振蕩5s，室溫下靜置以形成沉淀。

5、 取沉淀均勻加入到培養皿細胞中，輕輕晃動使沉淀于培養液充分混勻，置于37℃ 5%CO2培養箱培養。

6、 去除培養液，用PBS清洗細胞2次，加入5完全培養液繼續培養。

7、 對于瞬時轉染，在轉染的不同時間點內收集細胞并檢測，一般時間多控制在12～60h以內。

8、 對于穩定轉染，轉染后在非選擇性培養液培養，一般時間多控制在24～36h，以便外源基因表達。

9、 用胰蛋白酶消化細胞并傳代，更換適當的選擇培養液繼續培養，沒2～4d更換一次選擇培養液，一般10～14d會出現目的細胞克隆。

【注意事項】

1、注意無菌操作,盡量避免污染。

2、對于瞬時轉染,可以不用乙醇沉淀的DNA。

3、休克處理某些細胞系會使轉染效率大大提高,但應注意甘油暴露過久易導致細胞死亡。

4、轉染12～24h后,可以加入終濃度為10mmol/L的丁酸鈉溶液,可以提高病毒滴度。

5、該試劑用于轉染時應檢測其轉染效率,好的轉染效率應介于30～60%之間。

6、為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

【簡介說明】

HEPES緩沖鹽溶液(2×HeBS,pH7.05)外源基因導入真核細胞的方法有很多種，如磷酸鈣轉染法、DEAE-葡聚糖轉染法、脂質體法、電穿孔法、顯微注射法等。HEPES緩沖鹽溶液(2×HeBS)是一種常用的細胞轉染溶液，主要由HEPES、氯化鈉、磷酸鹽等組成，其最適pH值為7.05～7.12，經過濾除菌處理。

影響磷酸鈣轉染效率的因素主要有沉淀中DNA含量、DNA在細胞上停留的時間、休克時間。Leagene 2×HeBS要求DNA濃度在10～50μg為宜，Hela、BALB等細胞沉淀放置16h。

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