ISO10993亞急性經(jīng)口（28天）毒性試驗(yàn)報(bào)告由上海飛凡檢測(cè)研究中心權(quán)威提供！24小時(shí)免費(fèi)服務(wù)熱線：4007726386聯(lián)系人：13764818040（黃工） 1 范圍 本規(guī)范規(guī)定了嚙齒類動(dòng)物亞急性經(jīng)口（14/28d）毒性試驗(yàn)的基本原則、要求和方法。本規(guī)范適用于檢測(cè)化學(xué)品的亞急性經(jīng)口（14/28d）毒性。 2 規(guī)范性引用文件 OECD Guidelines for Testing of Chemicals （No.407，July 1995） 3 試驗(yàn)?zāi)康?為獲得一定時(shí)期內(nèi)反復(fù)多次經(jīng)口染毒受試樣品而引起的健康危害,以明確化學(xué)物對(duì)動(dòng)物的蓄積作用及其靶器官，并確定其大無(wú)作用劑量和低有作用劑量，為亞慢性、慢性毒性或致癌試驗(yàn)的劑量設(shè)計(jì)提供依據(jù)。 4 定義 4.1 亞急性經(jīng)口毒性（Subacute Oral Toxicity）：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在14～28天內(nèi)，每日經(jīng)口接觸受試樣品后所引起的健康損害效應(yīng)。 4.2 劑量（Dose）：是指經(jīng)口給予受試樣品的量，以重量g或mg表示，或是實(shí)驗(yàn)動(dòng)物單位體重的受試樣品的量（mg/kg bw）。 4.3 蓄積毒性(Cumulative Toxicity)：受試樣品在體內(nèi)蓄積引起的有害作用，蓄積有兩種形式：（1）物質(zhì)蓄積，即長(zhǎng)期反復(fù)接觸受試樣品時(shí)，由于吸收速度超過(guò)消除速度導(dǎo)致的該化學(xué)品在體內(nèi)逐漸增多；（2）功能蓄積，即受試品雖然在體內(nèi)的代謝和排出速度快，但其造成的損傷恢復(fù)慢，在前一次的損傷未恢復(fù)前又發(fā)生新的損傷，如此殘留損傷的累積稱為功能蓄積。 4.4 無(wú)可見有害作用水平（No Observed Adverse Effect Level，NOAEL）：在規(guī)定的試驗(yàn)條件下，用現(xiàn)有的技術(shù)手段或檢測(cè)指標(biāo)未觀察到任何與受試樣品有關(guān)的毒性作用的大染毒劑量。 4.5 低可見有害作用水平（Lowest Observed Adverse Effect Level，LOAEL）：在規(guī)定的試驗(yàn)條件下，受試樣品引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物形態(tài)、功能、生長(zhǎng)發(fā)育等發(fā)生有害改變的低染毒劑量。 4.6 附加組（Satellite Group）：是在試驗(yàn)中增設(shè)的一組，該組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)與其他組相同，染毒劑量與高劑量組相同，在高劑量組染毒停止后需繼續(xù)觀察14d，以研究毒作用的可逆性、持續(xù)性和遲發(fā)效應(yīng)。 5 試驗(yàn)基本原則 以不同劑量受試樣品每日給各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物連續(xù)經(jīng)口染毒28d，但在某些情況下，也可進(jìn)行染毒14d。染毒期間每日密切觀察動(dòng)物的毒性反應(yīng)，期間死亡或試驗(yàn)結(jié)束被處死的動(dòng)物要進(jìn)行解剖。 6 試驗(yàn)方法 6.1受試樣品 根據(jù)試驗(yàn)的目的和受試樣品的理化特性，經(jīng)口染毒可采用灌胃、或?qū)⑹茉嚇悠坊烊腼暳稀嬎确绞健Ｊ茉嚇悠窇?yīng)溶解或懸浮于適宜的賦形劑中，建議可以選擇]水，其次是植物油（如玉米油），或考慮使用其它賦形劑（如羧甲基纖維素、明膠、淀粉等）。對(duì)水以外的賦形劑，應(yīng)先了解其毒理特性。應(yīng)確定受試樣品在溶質(zhì)中的穩(wěn)定性。 6.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和飼養(yǎng)環(huán)境 6.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 一般可以選擇]健康成年大鼠，其它嚙齒類動(dòng)物也可使用。雌性動(dòng)物應(yīng)是未交配過(guò)的。大鼠以6～8周齡（150g左右）為宜，大鼠齡不超過(guò)9 w。在試驗(yàn)開始時(shí)，同性別動(dòng)物體重之間相差不得超過(guò)平均體重的20%。 6.2.2 飼養(yǎng)環(huán)境 試驗(yàn)前動(dòng)物應(yīng)在清潔級(jí)動(dòng)物房試驗(yàn)環(huán)境中適應(yīng)3d，再隨機(jī)分配到各試驗(yàn)組和對(duì)照組中。 動(dòng)物好單籠飼養(yǎng)，大鼠群養(yǎng)時(shí)每籠不超過(guò)5只。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室應(yīng)符合國(guó)家相應(yīng)規(guī)定。 6.3 劑量設(shè)計(jì) 動(dòng)物應(yīng)隨機(jī)分配到試驗(yàn)組與對(duì)照組中。試驗(yàn)時(shí)至少設(shè)三個(gè)劑量組和一個(gè)對(duì)照組，還可增設(shè)一個(gè)附加組，每組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物至少應(yīng)有10只（雌雄各半）。若計(jì)劃在試驗(yàn)過(guò)程中處死動(dòng)物，應(yīng)增加動(dòng)物數(shù)。高染毒劑量的設(shè)計(jì)應(yīng)為引起動(dòng)物明顯毒效應(yīng)但不造成動(dòng)物死亡，中間劑量應(yīng)引起較輕的可觀察到的毒性效應(yīng)，低劑量應(yīng)不出現(xiàn)任何毒效應(yīng)。劑量組的劑量間距以2～4倍為宜。對(duì)照組除不接觸受試樣品外，其它條件應(yīng)與染毒組完全相同。 如果試驗(yàn)中接觸水平超過(guò)每天1000mg/kg.bw尚不能引起可觀察到的毒性反應(yīng)，并且根據(jù)文獻(xiàn)資料能證明類似結(jié)構(gòu)的化學(xué)物質(zhì)亦不產(chǎn)生明顯毒性，就不需要用三個(gè)劑量組來(lái)進(jìn)行試驗(yàn)。經(jīng)飲水或喂飼染毒，應(yīng)以動(dòng)物體重調(diào)整受試樣品在水或飼料中的濃度。 6.4 試驗(yàn)步驟 每周染毒7d，連續(xù)28d。通過(guò)調(diào)整受試樣品溶液濃度使各劑量組經(jīng)口染毒的容量一致。 以喂飼或飲水方式染毒，受試樣品的混入應(yīng)不影響正常的營(yíng)養(yǎng)。應(yīng)根據(jù)染毒劑量和動(dòng)物體重配制飼料中受試樣品的濃度（mg/kg）；灌胃染毒時(shí)，每周稱體重一次，以作為調(diào)整受試樣品給藥量的依據(jù)。 6.5 試驗(yàn)觀察 6.5.1 臨床觀察 觀察期限一般為28d,每天一次,觀察并記錄皮膚、被毛、眼、粘膜的改變和呼吸系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、肢體活動(dòng)、行為方式等變化發(fā)生的時(shí)間、程度和持續(xù)時(shí)間。如發(fā)現(xiàn)動(dòng)物死亡或?yàn)l危應(yīng)及時(shí)解剖或冷藏后解剖檢查，以減少動(dòng)物同類互殘及死后組織自溶。 6.5.2 體重和攝食量 每日測(cè)量一次飼料或飲水消耗量,每周測(cè)體重一次。 6.5.3 血液學(xué)檢查 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)測(cè)定血紅蛋白濃度、紅細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞總數(shù)和分類、血球容積※，必要時(shí)測(cè)定凝血功能如凝血時(shí)間、凝血酶原時(shí)間、凝血激酶時(shí)間或血小板等指標(biāo)。 血液標(biāo)本應(yīng)在專用實(shí)驗(yàn)室采取，并在適當(dāng)條件下儲(chǔ)存。 6.5.4 臨床血液生化檢查 在試驗(yàn)結(jié)束時(shí)進(jìn)行。檢查指標(biāo)主要包括丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、白蛋白（Alb）、總蛋白(TP)。如有必要還應(yīng)做電解質(zhì)平衡、鈣(Ca)、磷(P)、氯(Cl)、鈉(Na)、鉀(K)、空腹血糖(Glu)（禁食時(shí)間要適當(dāng)）、堿性磷酸酶(ALP)與總膽紅素。在某些情況下，還須檢測(cè)與肝或其它器官有關(guān)的酶和膽酸，以及脂類化合物、激素、高鐵血紅蛋白、膽堿脂酶(ChE)活性等分析。如出現(xiàn)肉眼可見的臟器改變，可增加與之相應(yīng)的血液生化指標(biāo)。還可增加其它臟器以進(jìn)一步對(duì)觀察到的毒性反應(yīng)進(jìn)行研究。 6.5.5 尿液檢查 一般須進(jìn)行尿液的常規(guī)檢查，包括外觀、pH值、尿蛋白、尿糖和血細(xì)胞。如尿樣分析可作為預(yù)期或觀察得到的毒性指標(biāo)，則可增加有關(guān)的尿液檢查項(xiàng)目。 6.5.6 大體解剖 所有動(dòng)物皆應(yīng)進(jìn)行大體解剖。檢查體表、體腔的各開口處，顱、胸、腹腔及其內(nèi)容物。肝、肺、腎、腎上腺、睪丸(卵巢)、附睪、脾、腦、心臟等臟器應(yīng)盡快稱重，以防水分丟失。計(jì)算臟器系數(shù)。 6.5.7 病理組織學(xué)檢查 6.5.7.1 所有高劑量組和對(duì)照組動(dòng)物、大體解剖檢查有異常的臟器或組織； 6.5.7.2 如高劑量組動(dòng)物的器官或組織有病理組織學(xué)的變化，則應(yīng)檢查中、低劑量組的相應(yīng)器官和組織； 6.5.7.3 各劑量組大體解剖有異常的器官和組織； 6.5.7.4 附加組動(dòng)物的被其它試驗(yàn)組證明有病變的器官和組織。 6.6 結(jié)果統(tǒng)計(jì)與評(píng)價(jià) 6.6.1 結(jié)果處理 試驗(yàn)結(jié)果以表格形式總結(jié)，內(nèi)容包括各組動(dòng)物數(shù)、出現(xiàn)損傷的動(dòng)物數(shù)、損傷的類型和每種損傷動(dòng)物的百分比。采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行評(píng)價(jià)。 6.6.2 結(jié)果評(píng)價(jià) 綜合臨床觀察、臨床檢查、大體解剖、組織病理學(xué)檢查的結(jié)果，對(duì)受試樣品經(jīng)口28天染毒有無(wú)毒作用及其毒作用特點(diǎn)，包括受試樣品的靶器官、蓄積毒性等做出初步評(píng)價(jià)；對(duì)是否需要進(jìn)行更長(zhǎng)時(shí)間的毒理學(xué)試驗(yàn)及其劑量和觀察指標(biāo)提出建議。如發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組與對(duì)照組有顯著性差異或能得出劑量—效應(yīng)或劑量—反應(yīng)曲線時(shí)，應(yīng)對(duì)無(wú)可見有害作用劑量(NOAEL)和低可見有害作用劑量(LOAEL)初步評(píng)價(jià)。 7 鑒定報(bào)告 除一般鑒定報(bào)告的內(nèi)容外，還應(yīng)包括以下方面： 7.1 受試樣品的配制方法：受試樣品摻入飼料和水中的方法及劑量轉(zhuǎn)換的有關(guān)計(jì)算公式。 7.2 動(dòng)物的分組情況及對(duì)照組的選擇。染毒劑量的選擇。 7.3 各組動(dòng)物染毒開始時(shí)間、試驗(yàn)開始時(shí)的平均體重、結(jié)束時(shí)間，染毒方法介紹，染毒過(guò)程的描述、染毒過(guò)程中動(dòng)物體重的變化及動(dòng)物飼料、水的消耗量。 7.4 觀察次數(shù)及持續(xù)時(shí)間，依動(dòng)物的性別、組別觀察試驗(yàn)中癥狀出現(xiàn)、消失的時(shí)間，癥狀特點(diǎn)的文字描述，動(dòng)物死亡及剖檢的時(shí)間，處死動(dòng)物的體重及各器官的重量，大體解剖及病理檢查所見病變特點(diǎn)的詳細(xì)文字描述，血液及生化結(jié)果并附參考正常值。 7.5 各種效應(yīng)的頻數(shù)、發(fā)生率或均值及標(biāo)準(zhǔn)差。 7.6 所用統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法及計(jì)算結(jié)果。 7.7 可能時(shí)繪出劑量-效應(yīng)或劑量-反應(yīng)曲線。 8 試驗(yàn)結(jié)果的解釋 本項(xiàng)試驗(yàn)結(jié)果可提供亞急性經(jīng)口（28天）染毒的毒作用資料。其結(jié)果外推至人的有效性是有限的。 涉及地區(qū)：廣東省、浙江省、福建省、海南省、云南省、廣西省、貴州省、新疆省、四川省、重慶市、西藏省、湖南省、江西省、湖北省、上海市、北京市、天津市、安徽省、江蘇省、甘肅省、寧夏省、內(nèi)蒙古省、黑龍江省、吉林省、遼寧省、山東省、陜西省、山西省、河南省、河北省