喹乙醇(Oiaqiiindox)，又稱喹酰胺醇，屬于喹噁啉類，冷水中微溶，甲醇、乙醇和氣仿中幾乎不溶。是一種化學(xué)合成抗菌促生長(zhǎng)劑。因其具有廣譜抗菌效果 和促生長(zhǎng)作用，作為飼料添加劑被廣泛用于畜禽及水 產(chǎn)品的養(yǎng)殖。大疳生物毒性試驗(yàn)研究表明，喹乙醇可 在動(dòng)物體內(nèi)形成殘留，具有明顯的蓄積毒性和DNA 顯性損傷等毒副作用。基于可能對(duì)人體健康造成危害，歐盟委員會(huì)2788/98決議規(guī)定禁止喹乙醇的使 用。國(guó)內(nèi)也對(duì)喹乙醇的使用童做了限制，并且為了 加強(qiáng)對(duì)喹乙醇的監(jiān)控,制定了水產(chǎn)品、肉與肉制品、動(dòng)物飼料中喹乙醇的檢測(cè)方法。近來與豬肉有關(guān)的食品安全問題頻發(fā)，為了能保證食品的安全，建立肉中 喹乙醇的測(cè)量方法是十分必要的。

　　目前，對(duì)于飼料、肉類以及水產(chǎn)品等食品中喹乙 醇的檢測(cè)方法主要有金標(biāo)快速檢測(cè)、液相色譜法、超高效液相色譜、液相-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)。雖然液 相-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)被越來越多地應(yīng)用于動(dòng)物源性食品中禁用藥物的檢測(cè)，但其價(jià)格昂貴，檢測(cè)成本高，對(duì) 其普及發(fā)展有一定的限制;液相色譜儀則越來越多的 應(yīng)用到基層的檢驗(yàn)工作。本文針對(duì)豬肉的喹乙醇?xì)?留，建立了高效液相色譜檢測(cè)方法，并通過對(duì)樣品前處理等方面進(jìn)行探討，希望能對(duì)相關(guān)的工作有一定的 幫助。

　　1材料與方法

　　1.1儀器與試劑

       AgilentllOOHPLC儀：四元泵，柱溫箱，DAD檢測(cè)器(二極管陣列檢測(cè) 器)。雙列四孔水浴鍋、禍旋混合器(GENIUS3)、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(HE-52)、臺(tái)式離心機(jī)、真空離心濃縮儀(ZLS -1)。乙腈(色譜純)、甲醉(色譜純)、正已烷(色譜 純)、實(shí)驗(yàn)用水(符合GB/T 6682三級(jí)水和二級(jí)水的要 求)、喹乙醇(Fluka，純度96.1%,批號(hào):33987)。

　　1.2方法

　　1.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取 0.0010 g喹乙醇于10 ml容最瓶中，用甲醇定容至刻度，此標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度100μg/ml。標(biāo)準(zhǔn)溶液使用液:分 別吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液,用乙腈+水(10 +90)配制成濃度為

　　2.0 μg/ml、4.0μg/ml、8.0 μg/ml、10 μg/ml

　　的標(biāo)準(zhǔn)溶液使用液。

　　1.2.2 色譜條件

　　色譜柱：ODS柱(200 mm x 4.6 mm,5 μm);流動(dòng)相：乙腈+水(10 +90);流速： 0.80ml/min;柱溫:35 ℃進(jìn)樣量：20 μl;檢測(cè)波長(zhǎng)：

　　380 nm;保留時(shí)間:5.53 min。

　　1.2.3 樣品前處理

　　稱取樣品4.0 g于50 ml具塞離心管中，加20 ml甲醉+水(1 +1)，混勻于60℃水浴10 min,5 000 r/min 離心10 min，取上清液到 100 ml分液漏斗中，再用甲醇10 ml提取一次,合并上 清液，用20 ml正已烷凈化，靜置10 min后，將下層液 體收集到旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中。用10 ml甲醇洗正已烷層， 合并提取液,60℃旋轉(zhuǎn)至近1 ml,轉(zhuǎn)移到1.5 ml血清管中，用真空離心濃縮儀濃縮至1 ml以下，用甲醇定容到1 ml。渦旋，高速離心，取20 μl上清液上機(jī)分析。

　　2.結(jié)果與討論

　　2.1樣品前處理

　　樣品的前處理方法對(duì)喹乙醇的分析至關(guān)重要。喹乙醇在熱水中溶解度很大，而在有機(jī) 溶劑中溶解度較低,所以本文采用60℃水浴加熱的 方法進(jìn)行提取。經(jīng)與乙腈+水(80+20)作為提取液 進(jìn)行比較，結(jié)果顯示采用熱水作為提取液的回收率 明顯較高。其中乙腈+水作為提取液的回收率在 60%左右，而熱水作為提取液的回收率在85%以上。 因?yàn)樗芤翰灰诐饪s處理，故采用有機(jī)溶液和水進(jìn)行 混合進(jìn)行提取回收率在85%左右。通常用甲醇和乙膪做為提取液的有機(jī)部分，實(shí)驗(yàn)表明：在相同分?jǐn)?shù)的 水溶液其提取效果基本一致，由于乙腈毒性遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于 甲醇，本文采用甲醉和水組成提取液。在甲醉和水的 體積比方面，分別進(jìn)行了 20 +80、30 +70、40 +60、50 + 50、60+40、70 + 30、80 +20 實(shí)驗(yàn)。在50 +50 以后 提取的效果一致,但隨著水體積的增加，旋轉(zhuǎn)濃縮的 時(shí)間加長(zhǎng)，因此選用了甲醇+水(50 +50)的提取條 件。對(duì)于動(dòng)物源性樣品，脂肪等雜質(zhì)是主要的干擾物 質(zhì)。加人正己烷進(jìn)行凈化，不僅能有效地去除提取液中的水溶性雜質(zhì)和脂肪,并且具有較強(qiáng)的脫色作用。 用甲醇凈化正已烷，可以提高回收率，從65%左右提

　　高到85%左右。

　　2.2方法的線性

　　方法測(cè)定用的標(biāo)準(zhǔn)曲線為 2.0 μg/mlN4.0μg/mlN6.0 μg/mlN8.0 μg/ml 10 μg/ml其測(cè)定的峰面積分別為99.3 mAU • s、199mAU·s、 299 mAU • s、391 mAU • s、486 mAU • s;

　　則喹乙醇的線性回歸方程:y =48.67x +2.50,相關(guān)系數(shù)r:0.9998。

　　喹乙醇標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖見圖1。

　　2.3方法精密度和回收率

       準(zhǔn)確稱取4.0 g樣品作為 本底，添加2.0網(wǎng)、5.0網(wǎng)、9.0叫喹乙醇做加標(biāo)回收 實(shí)驗(yàn)，同時(shí)做6個(gè)平行樣,按分析步驟進(jìn)樣樣品前處理 后，上機(jī)測(cè)定。

結(jié)果見表1,樣品加標(biāo)譜圖見圖2。

　　本方法回收率在83.2% ~ 84.6%之間。用6個(gè) 加標(biāo)后樣品測(cè)定值計(jì)算精密度值為1.2% ~ 2.2%.

　　2.4方法檢出限

　　基線點(diǎn)對(duì)點(diǎn)噪音為0.04 mAU,3 倍噪音時(shí)，對(duì)應(yīng)濃度為0.01 μg/ml，當(dāng)取4.0 g樣品 時(shí)，檢出限為40 μg/kg。

　　本方法檢出限低，回收率高，定性可靠，定景準(zhǔn) 確，適合于豬肉中喳乙醉殘留的檢測(cè)。本實(shí)驗(yàn)室用該 方法對(duì)本地區(qū)市場(chǎng)流通的25份豬肉進(jìn)行了檢測(cè)，均未檢測(cè)出喹乙醇?xì)埩簟?/span>

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